Melhores práticas para validação de desinfetantes em salas limpas 

Os desinfetantes usados em salas limpas nas indústrias farmacêutica, biotecnológica e de dispositivos médicos devem ser validados quanto ao uso pretendido. Esta é uma expectativa regulatória para garantir que o desinfetante apropriado seja empregado e que o controle microbiano seja mantido no ambiente. O teste de eficácia de desinfetante é um componente da validação, onde o desinfetante é desafiado quanto à eficácia antimicrobiana no laboratório. A dica técnica a seguir apresenta práticas recomendadas para o teste de eficácia de desinfetante de laboratório.

Expectativas gerais

A diluição de uso, o tempo de contato e a temperatura de exposição do desinfetante avaliado no estudo devem corresponder às condições reais e pretendidas de uso do desinfetante na área classificada.

De uma perspectiva regulatória, é fundamental avaliar os isolados do local do monitoramento ambiental (ME). Selecione os isolados para uso no teste de eficácia de desinfetante após as condições do ME de base terem sido estabelecidas.  

Elas devem ser baseadas em:

• Frequência de ocorrência
• Dificuldade prevista e/ou demonstrada para desinfecção (por exemplo, Bacillus cereus)
• Ocorrência em grande número, quando recuperado

Corpos de prova

Trabalhe com fabricantes de superfícies para salas limpas para obter corpos de prova representativos de materiais de superfície para áreas classificadas. As superfícies com especificações bem definidas (por exemplo, 304 SS, 316L SS) podem ser adquiridas de opções gerais de fornecimento.

A condição do corpo de prova pode ter um impacto significativo no teste de eficácia de desinfetante. Os corpos de prova devem:

• Não apresentar ferrugem ou corrosão que não seja representativa das superfícies da área classificada
• Ser planas
• Não estar em um suporte que seja absorvente, que solte pelos ou fiapos

Avalie os corpos de prova de material de superfície quanto à tolerância ao calor, se o processamento for feito em um esterilizador de calor úmido. A descontaminação química com um esporicida, como o esterilizante Spor-Klenz® RTU, também pode ser usada. O processamento inadequado dos corpos de prova pode impactar negativamente os testes.

Microrganismos

Aumente a probabilidade de culturas bacterianas vegetativas viáveis, por meio de:

• Incubação de culturas por 18-24 horas para a maioria das bactérias vegetativas
• Uso de suspensões dentro de 2 horas, se armazenadas em temperatura ambiente ou dentro de 24 horas, se armazenadas refrigeradas
• Uso de uma curva de espectrofotômetro para estimar os níveis de unidades formadoras de colônias (UFC) em suspensão, em vez de aguardar os resultados populacionais

Certifique-se de que a concentração da suspensão do inóculo seja suficiente para demonstrar a redução de log10 necessária. Considere o limite de detecção do método de recuperação e a perda potencial de células viáveis devido à mortalidade por dessecação. Estudos preliminares de secagem de espécies problemáticas, como Pseudomonas aeruginosa e Candida albicans, podem evitar a necessidade de testes repetidos relacionados à baixa recuperação.

Se estiver trabalhando com uma suspensão de esporos fúngicos (conídios), é necessária a filtragem da suspensão de esporos para remover fragmentos miceliais. A filtragem pode ser obtida usando uma variedade de materiais de filtragem, como lã de vidro estéril ou um filtro fritado. A presença de fragmentos miceliais ou hifas pode proteger os esporos de fungo do contato com o desinfetante ou esporicida.

Garanta que os critérios de aceitação de redução de log10 apropriados sejam usados para avaliar a eficácia dos desinfetantes. A Farmacopeia dos Estados Unidos (USP) <1072> Desinfetantes e Antissépticos exige:

• Redução de 3 log10 de bactérias vegetativas
• Redução de 2 log10 de esporos bacterianos

Estes são os critérios de aceitação apropriados para testes de eficácia de desinfetantes para um ambiente de fabricação asséptico.

Procedimento de laboratório

Ao armazenar uma diluição de uso de um desinfetante concentrado (por exemplo, em um tanque de retenção ou borrifador), é uma expectativa regulatória ter dados para respaldar a data de validade definida internamente para a diluição de uso.

Tome muito cuidado para evitar depositar organismos fora da área de exposição pretendida para o produto de teste. Uma quantidade baixa como 0,01 µL de inóculo não exposto ao produto de teste pode levar à falha do teste.

Uma validação de neutralização deve ser conduzida para qualificar um tempo discreto de contato úmido. USP <1227> Validação da recuperação microbiana de itens farmacopeicos, USP <61> Exame microbiano de produtos não estéreis: testes de enumeração microbiana e EN 13697 Desinfetantes e antissépticos químicos fornecem possíveis desenhos de estudo para validação de neutralização. Abaixo encontra-se uma lista de neutralizadores químicos comuns para ingredientes ativos específicos.

TABELA 1. Neutralizadores químicos de ativos desinfetantes comuns 

Avalie os meios de cultura e as condições de incubação apropriados de cada organismo antes do início do estudo.

A recuperação por imersão dos corpos de prova normalmente é o método de recuperação mais eficiente. O método de teste de suporte de disco quantitativo da norma ASTM E2197 e a norma EN 13697 de desinfetantes e antissépticos químicos fornecem métodos potenciais de recuperação por imersão. O tamanho do corpo de prova de superfície pode ter um impacto significativo no método de recuperação. A adequação dos métodos de recuperação deve ser avaliada com corpos de prova de superfície de estudo específicos.

Recursos adicionais:

• USP <1072> Desinfetantes e antissépticos
• PDA TR 70 Fundamentos de programas de limpeza e desinfecção para instalações de fabricação asséptica
• EN 13697 Desinfetantes e antissépticos químicos
• ASTM E2197 Método de teste quantitativo padrão de suporte de disco
• ASTM E2614 Guia padrão para avaliação de desinfetantes para salas limpas